基于10X genomics平臺，一次性能夠分離500～10,000個細胞，并能夠將分離的單個細胞的微量mRNA通過高效擴增后再進行高通量測序，有效的解決了組織樣本無法破解的細胞異質性難題，有助于發現新的細胞類型；并基于大量的單細胞基因表達數據，可進行細胞表達特征聚類、亞群表達特征分析、標志物篩選等方面的研究。
1 單細胞樣本檢測：
將樣本制成單細胞懸浮液，用Countess? II Automated Cell Counter 進行細胞計數和細胞活率測定，細胞活性高于80%，并將細胞濃度調整到理想濃度1000個/μL。
2 文庫構建
將制備好的單細胞懸浮液與含有barcode信息的凝膠珠以及酶的混合物結合，然后被位于微流體“雙十字”液滴中進行液滴包裹，從而形成GEMs（Gel Bead-In-EMulsions），有效GEMs中，10X Barcode將與cDNA產物連接在一起，后續用于擴增質檢。
3 測序分析：
進一步用illunima平臺進行測序，獲得每個細胞的基因表達數據。
1 細胞分群：
其目的是為了進一步剖析樣本的異質性
2 差異表達分析、鑒定亞群特征基因：
為了進一步確認較為理想的分群結果，并確認可能作為亞群的特征基因
3 差異基因功能注釋富集分析：
包括GO注釋富集分析、KEGG注釋富集分析、疾病注釋富集分析、轉錄因子注釋、蛋白互作網絡
進一步分析了在微環境中此類細胞的豐富度。并詳細研究了腫瘤浸潤性T淋巴細胞的多樣性及其功能狀態。
通過對黑色素瘤開展的大規模單細胞轉錄組測序，系統研究了腫瘤內不同細胞亞群的組成、細胞亞群的功能以及腫瘤的微環境，為精準免疫治療提供了參考。
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